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    產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒的優(yōu)點和檢測流程

    點擊次數(shù):897次  更新時間:2019-11-25
     產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒屬于腸桿菌科腸桿菌屬,為革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌,是一種條件致病菌。當宿主機體狀態(tài)改變或細菌進入腸道以外的部位,可引起呼吸道、泌尿生殖道、血液等感染,也是老年人感染或院內獲得性肺炎的常見致病菌。產(chǎn)氣腸桿菌可以產(chǎn)生B一內酰胺酶,多年來由于抗生素的濫用,該類細菌引起醫(yī)院感染的概率不斷上升,已成為院內感染常見的條件致病菌。

    產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒具有以下優(yōu)點:
    1、本發(fā)明采用基因克隆技術,將產(chǎn)氣腸桿菌Cad基因片段插入到載體pMD18-T中,獲得含有Cad基因片段的重組質粒,以此作為標準品。根據(jù)產(chǎn)氣腸桿菌Cad基因片段編碼基因序列設計并合成一組特異性引物和探針,優(yōu)化PCR反應條件,建立以實時熒光定量聚合酶鏈反應為平臺的檢測方法,并對所建立的方法進行評估。
    2、本發(fā)明通過提取產(chǎn)氣腸桿菌的基因組DNA,結合實時熒光定量PCR檢測技術,可達到準確定量待測標本中產(chǎn)氣腸桿菌含量的目的,對判斷產(chǎn)氣腸桿菌活性菌的含量以及后續(xù)研究泌尿道感染具有重要意義。
    3、本發(fā)明快速、靈敏、特異性好。
     
    產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒的檢測流程:
    檢測樣品前處理
    1、食品樣品的直接檢測:樣品處理參考國標GB/T 4789.5-2012進行。以無菌操作取檢樣25g(mL),加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質杯,用旋轉刀片式均質器以8 000 r/min~10 000 r/min均質;或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質袋中,用拍擊式均質器連續(xù)均質1 min~2 min,液體樣品振蕩混勻即可。于41.5 ℃±1℃,厭氧培養(yǎng)16 h~20 h。
     
    2、疑似菌落檢測:直接用接種環(huán)或者無菌TIP頭挑去肉眼可見的菌團,配成1×、10×兩個梯度稀釋液,分別在PCR管中按照以下步驟擴增。
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